Distribution of thy polymorphic markers in the CFTR gene
Cisticna fibroza (CF) je autosomno recesivna bolest koja nastaje kao posljedica mutacije u samo jednom genu, genu CFTR (od engl. cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene). Produkt gena je protein CFTR koji djeluje kao prenosilac iona klora kroz membrane epitelnih stanica. Unutar gena CFTR do danas je opisano preko 1000 mutacija, od kojih su mnoge vrlo rijetke, a njihova raznolikost i razlicita zastupljenost unutar jedne populacije u mnogome otežavaju dijagnostiku cisticne fibroze. Najucestalija mutacija je delecija tri para baza u desetom eksonu, delta F508, s prosjecnom ucestaloscu od 67%. U genu CFTR opisan je i velik broj polimorfizama (preko 200) koje se primjenjuju u standardoj dijagnostici, pogotovo unutar obitelji s nepoznatom mutacijom. Do danas je objavljeno niz studija koje govore o važnosti primjene polimorfnih biljega u dijagnosticiranju i pracenju nasljeđivanja cisticne fibroze. Cilj ove studije bio je odrediti raspodjelu tri polimorfna, intragenska biljega, IVS 8 CA, IVS 1 CA i IVS 17b CA, unutar zdravih ispitanika i ispitanika koji imaju klinicku sliku cisticne fibroze. Kod oboljelih osoba pratili smo i pojavnost 15 najucestalijih mutacija (DF508, DI507, G542X, G551D, R553X, N1303k, 621+1G--T, W1281X, 3849+10kbC--T, 1717-1G--A, 2789+5G--A, 3849+4A--G, R1162X, 1898+1G--A i R117H). Usporedbom rezultata obje analize odredili smo povezanost pojedine mutacije i pripadajuceg haplotipa. Poznato je, naime, da su i pojedine mutacije znacajno cesce povezane s pojedinim polimorfnim biljezima. Za umnažanje ponavljajucih sljedova nukleotida koristili smo metodu lancane reakcije polimerazom, PCR, upotrebom ranije objavljenih pocetnica. Tocan broj ponavljajucih sljedova odredili smo elektroforezom u gelu poliakrilamida. U cilju određivanja raspodjele pojedinih haplotipova unutar zdravih i bolesnih ispitanika proveli smo statisticku analizu te odredili postoji li povezanost pojedine mutacije sa specificnim haplotipom. Za određivanje 15 najucestalijih mutacija također smo koristili metodu lancane reakcije polimerazom, uz upotrebu ranije objavljenih pocetnica, a analizu dobivenih odsjecaka provodili smo metodom RFLP, te analizom heterodupleksa. Rezultati ove studije pokazali su, dosad nepoznatu, raspodjelu polimorfnih biljega unutar gena CFTR u stanovnika Hrvatske. Služit ce kao smjernica u dijagnosticiranju cisticne fibroze metodama molekularne dijagnostike, narocituo unutar obitelji koje su opterecene cisticnom fibrozom, a gdje nisu pronađene mutacije gena.